מיקרוסקופ פלואורסצנטי והדמיית תאים

מיקרוסקופיה היא לב ההבנה של ארכיטקטורת רקמות, מבנה תאים ודינמיקה, כמו גם תפקוד מולקולרי. מיקרוסקופ פלואורסצנטי משמש באופן קבוע לקביעת מידע מרחבי וטופולוגי על תאים ורקמות. מכשור מיקרוסקופי סריקת לייזר מתוחכם, מצלמות דיגיטליות רגישות במיוחד ומבחני פלואורסצנציה מיוחדים מאפשרים לדמיין אירועים תאיים בזמן אמת עד לרמה המולקולרית.

מיקרוסקופ פלואורסצנטי בשימוש

המיקרוסקופ פלואורסצנטי והדמיה של תאים המשאבים המשותפים מקדם את המצוינות במחקר הסרטן על ידי העמדת מכשור ותוכנה חדישים ביותר להדמיית כמות פלואורסצנטית כמותית, רב-מידתית ורב-מודאלית.

קידום מצוינות במחקר סרטן

תמונת נוארוניםהמיקרוסקופ פלואורסצנטי והדמיית תאים משאבים משותפים מסייע לחוקרים בסיסיים ורופאים לדגימות תמונה ולפרסום מאמרים בעלי פרופיל גבוה:

  • להבהיר מנגנונים תאים ומולקולריים של סרטן, מחלות אימונולוגיות, זיהומיות, מטבוליות, נוירולוגיות וכלי דם
  • הערך יעילות טיפולית בתאים ובדגימות המטופלים
  • בדוק ננוטכנולוגיות חדשות במבחנים מבוססי תאים
  • למדוד כמותית שינויים במורפולוגיה של הרקמות ובפתולוגיה

המיקרוסקופ פלואורסצנטי ומשאבים הדמיית תאים מספקים לחוקרי UNM גישה למכשור חדיש ביותר עבור טכניקות פלואורסצנטיות מרובות וטכניקות מיקרוסקופ אור מועברות:

  • סריקת לייזר מיקרוסקופ יחיד ורב פוטונים ומערכות הדמיה היפר-ספקטרלית מאפשרות הדמיה וכימות בו זמנית של כתמים היסטוכימיים ותוויות פלורסנט.
  • סה"כ פלואורסצנטיות של השתקפות פנימית (TIRF), מעקב אחר חלקיקים בודדים (SPT) ויישומי מיקרוסקופ לוקליזציה מולקולה יחידה (SMLM) לכימות אירועי תאים חיים דינמיים ולהשיג רזולוציה מתחת לגבול העקיפה של האור
  • הדמיה רדיומטרית מאפשרת כימות של שינויים בזמן אמת בסידן ובריכוזי יונים אחרים בתגובה לאיתות התא 

במיקרוסקופ פלואורסצנטי ומשאבים הדמיית תאים יש צוות משאבים שמציע חוקרים:

  • ייעוץ מומחה בנושא תכנון ניסויים והכנת דגימות 
  • הדרכה
  • הדמיה בתשלום
  • סיוע שוטף
דוא"ל למשאב המשותף של מיקרוסקופיה פלואורסצנטית

דיאן לידקה, דוקטורט; מנהל סגל

המחלקה לפתולוגיה
2325 קמינו דה סלוד, CRF203A
מרכז סרטן מקיף של UNM
אלבוקרקי, ניו מקסיקו 87131
טלפון: (505) 272-8375

שלחו דוא"ל לד"ר דיאן לידקה

קית 'לידקה, דוקטורט; יועץ מיוחד

שדרות ייל 210 NE, 2218
בניין מדע בין-תחומי לפיזיקה ואסטרונומיה
אלבוקרקי, ניו מקסיקו 87106
טלפון: (505) 277-2616

שלח דוא"ל לד"ר קית 'לידקה

כדי לאשר שימוש במשאב משותף זה, אנא כלול את הפרטים הבאים:

מחקר זה נתמך בחלקו על ידי מענם התמיכה של מרכז הסרטן המקיף של UNM, NCI P30CA118100, ועשה שימוש במשאבים המשותפים של מיקרוסקופ פלואורסצנטי והדמיה תאית

לאחר הפרסום, אנא שלח אלינו אחת מהדפסותיך מחדש או תמונות השער שלך.

מכשור

מיקום: CRF212

פרטי מיקרוסקופ

  • Custom Olympus IX83 inverted microscope with Martzhauzer ultra-fast motorized XY stage with piezo Z insert.
  • Cool LED pE-300Ultra LED multi-spectral LED (wide field) and Lumencor PEKA LED (bright field)
  • 10X/0.4NA, 30X/1.05NA silicone oil, 40X/1.25NA silicone oil, 60X/1.3NA silicone oil 100x/1.35NA silicone oil
  • DIC capable for 30X thru 100x optics.
  • בקר אולימפוס בזמן אמת לסינכרון מצלמה ומעוררות מדויקים זמנית
  • Yokogawa CSU-W1 dual camera spinning disk head with SD-SR 3X mag changer
  • Hamamatsu ORCA-Fusion back-thinned Gen III sCMOS cameras
  • 4 individual OBIS laser lines: 405nm (50mW); 488nm (100mW); 561nm (100mW) and 640nm (100mW)
  • 4-color imaging (2 channel simultaneous) Emission filter FWHMs as follows: Blue (447/60); GREEN (525/50); RED 607/36 and Far RED (685/40)
  • Non-photo destructive IR ZDC2 autofocus for extremely fast one shot or continuous autofocus capabilities
  • Tokai Hit WSKMX live-cell imaging stage top incubator
  • תוכנת רכישת תמונות של ממד אולימפוס
  • GPU enabled post-processing provided by Huygens Essentials for image restoration (deconvolution)

יישומים אפשריים

  • High speed, multi-dimensional live-cell imaging where phototoxicity is of concern
  • 3D acquisition, time lapse and tiling
  • Volumetric samples such as spheroids/organoids, zebrafish and drosophila embryo

מיקום: CRF219

מערכת פרטים

  • מיקרוסקופ הפוך אולימפוס IX83 מותאם אישית עם שלב סריקת Asylum 3D XYZ piezo
  • Excelitas Turbo LED רב ספקטרלי (שדה רחב) ומנורת הלוגן (שדה בהיר)  
  • מטרת טבילת שמן 10X/0.3NA, 20X/0.7NA ו-100X/1.4NA
  • מצלמת CCD מונוכרום Olympus XM10 
  • ראש AFM של Asylum MFP Origin עם טווח נסיעה מורחב להכנות ביולוגיות
  • תוכנת מחקר מקלט עבור בקרות AFM
  • תוכנת Olympus cellSens לבקרת מיקרוסקופ אור
  • BioHeater לעבודה עם תאים חיים/רקמות
  • בדיקות הדרכה מסופקות עד גמר הכמויות!
  • צלחות תואמות AFM: WillCo מכסה תאים תחתונים (Ted Pella cat # 14025-20) ו-BD Falcon (#351006) צלחות תרבות פוליסטירן
  • ניתן למצוא משטחים שטוחים מבחינה אטומית (נציץ או HOPG) לסריקה ברזולוציה גבוהה ב-Ted Pella.com - אנא בקש עזרה

יישומים אפשריים

  • מצב מגע מתחלף (AC)., aka Tapping Mode, להדמיה בקנה מידה ננומטרי בהכנות יבשות או רטובות
  • מצב יצירת קשר עבור מדידות כוח מכני (מודול אלסטי, הידבקות, הזחה ומיפוי כוח) בהכנות יבשות או רטובות 

מיקום: CRF216

פרטי מיקרוסקופ

  • מיקרוסקופ הפוך לייקה DMi8 עם במה ממונעת XY
  • מנורת פלואורסצנטית של מתכת הליד ומנורת העברת הלוגן
  • 10X, 20X שמן, 25X מים, 63X DIC מים ו 63X שמן DIC מטרות
  • עירור לייזר עבור PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, Rhodamine ו- Cy5 דמוי פלואורופורים
  • לייזר אור לבן מתכוונן ופועם: 470 - 670 ננומטר
  • שני לייזרים נוספים: דיודת לייזר 405 ננומטר ורב ארגון (קווי 458, 477, 488, 514 ננומטר)
  • שישה גלאים: 2 גלאי ספקטרום היברידיים * (HyD); 2 SMD ספקטרלי ** HyDs, PMT ספקטרלי סטנדרטי אחד ו- PMT משודר (חיצוני)
  • שלב Galvo Z
  • סורק תהודה
  • פיקו נבל 300 מודול מיקרוסקופ פלואורסצנטי לכל החיים (FLIM)
  • תוכנת רכישת LASX
  • תוכנת FLIM של SymphoTime64 (PicoQuant)
  • תוכנת Huygens Deconvolution
  • חממה מובילה של Tokai Hit Stage להדמיה סלולרית חיה

* HyDs הם גלאים מיוחדים המשתמשים בפוטוקתודות GAsP ודיודות צילום מפולות

** גלאי מולקולה יחידה (SMD)

יישומים אפשריים

  • דגימות קבועות המותקנות בשקופית סטנדרטית עם תלושי כיסוי 1.5
  • דגימות תאים חיים (LabTekII # 1.5 רב בארות או 35 מ"מ (# 1.5) כיסוי תחתון)
  • FLIM FRET (קבוע או תא חי)
  • הלבנת מקבלים סריג (קבוע)
  • סריג פליטה רגיש (תא חי)
  • FRAP (תא חי)
  • רכישת תלת מימד (Z-Stacks) והדמיית Time Lapse
  • ערבוב רב-ספקטרלי
  • שטח גדול, סריקות אריחים רב מימדיות
  • רזולוציית סופר באמצעות עיבוד שחזור תמונות (~ 130 ננומטר)

מיקום: CRF226

פרטי מיקרוסקופ

  • Zeiss AxioObserver מיקרוסקופ הפוך עם במה ממונעת XY
  • מנורת פלואורסצנט מתכת הלידית ומנורת העברת הלוגן
  • 10x, 20x, 40x שמן, 63x שמן & 63x מטרות טבילה במים
  • DIC זמין עם מטרות 10x, 20x, 40x ו- 63x
  • עירור לייזר עבור PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, Rhodamine ו- Cy5 דמוי פלואורופורים
  • ארבעה לייזרים במצב מוצק: 405 ננומטר, 488 ננומטר, 561 ננומטר, 640 ננומטר
  • איתור ערוצים וספקטרלים - גלאי PMT של GaAsP
  • זיהוי סימולטני ב -3 ערוצים זמינים במצב ערוץ
  • גלאי מערך Airyscan לעלייה של 1.7X ברזולוציית XY
  • גלאי אור משודר
  • מערכת דגירה של תאים חיים: בקרת טמפרטורה, לחות ו- CO2
  • תוכנת רכישת תמונות Zen Blue

יישומים אפשריים

  • דגימות קבועות המותקנות בשקופית סטנדרטית עם תלושי כיסוי 1.5
  • דגימות תאים חיים (LabTekII # 1.5 רב בארות או 35 מ"מ (# 1.5) כיסוי תחתון)
  • הלבנת מקבלים סריג (קבוע)
  • סריג פליטה רגיש (תא חי)
  • FRAP (תא חי)
  • רכישת תלת מימד (Z-Stacks) והדמיית Time Lapse
  • ערבוב רב-ספקטרלי
  • שטח גדול, סריקות אריחים רב מימדיות
  • רזולוציית סופר באמצעות עיבוד שחזור תמונות (~ 130 ננומטר)

מיקום: CRF226

פרטי מיקרוסקופ

  • מיקרוסקופ הפוך מותאם אישית של אולימפוס IX83 עם שלב XY ממונע ASI עם הכנסת piezo Z.
  • Excelitas טורבו רב-ספקטרלי LED (שדה רחב) ו- LED לבן Lumencor (שדה בהיר)  
  • 20x / 0.8NA שמן, 60x / 1.5NA שמן TIRF, 60x / 1.2NA מים, ו 100x / 1.4NA מטרות שמן
  • DIC המסוגל 60x ו 100x אופטיקה.
  • בקר אולימפוס בזמן אמת לסינכרון מצלמה ומעוררות מדויקים זמנית
  • 4 לייזר קו MITICO TIRF מאיר לעומק ריכוז עצמאי
  • 4 קווי לייזר נפרדים ל- TIRF: 405nm (100mW); 488nm (100mW); 561nm (100mW) ו- 640nm (140mW)
  • מיקרוסקופ שחזור אופטי סטוכסטי ישיר (dSTORM), מיקרוסקופ לוקליזציה אקטיבית (PALM) וגיליונות אופטיים למינריים נוטים (HILO) הדמיה אפשרית
  • Hamamatsu Fusion מצלמת sCMOS ומפצל תמונות Gem-W W-View עבור רכישת תאים חיים בו זמנית בצבע.
  • פוקוס אוטומטי IR ZDC2 שאינו פוטו-הרסני עבור יכולת צילום מהירה במיוחד או יכולות פוקוס אוטומטי רציף 
  • תנור חימום אובייקטיבי של BiopTechs ליישומי תאים חיים לטווח קצר
  • תוכנת רכישת תמונות של ממד אולימפוס

יישומים אפשריים

  • דגימות קבועות עם תלושי כיסוי של 1.5H
  • דגימות תאים חיים (LabTekII # 1.5H רב-באר או 35 מ"מ (# 1.5H) כיסוי תחתון)
  • רכישת תלת מימד (Z-Stacks) והדמיית Time Lapse
  • יישומים ספציפיים כוללים זיהוי מולקולה יחידה של TIRF תאים חיים, HILO, 2D dSTORM או PALM 
  • עיבוד פוסט מאופשר באמצעות GPU מסופק על ידי Huygens Localizer

מיקום המצלמה: CRF218

פרטי מיקרוסקופ

  • מיקרוסקופ הפוך אולימפוס IX-71
  • מנורת פלואורסצנטי כספית ומנורת העברת הלוגן
  • מונוכרומטור - טווח עירור 350nm-670nm
  • לייזרים: 405nm, 488nm, 520nm ו- 642nm
  • 20x, 60x H2O, 100x שמן, 150x מטרות TIRF
  • מסנני פלואורסצנטי לנקודות קוונטיות, DAPI, FITC, ופלואורופורים דמויי רוד, Fura-2, Indo-1
  • תוכנת רכישת תמונות של אנדור IQ
  • תנור חימום אובייקטיבי ומכשירי פתולוגיה חיים דגירת תאים חיים עם CO2, חום, לחות
  • במה ממונעת XYZ
  • מצלמת אנדור iXon EM-CCD
  • מפצל תמונות אופטי (כפול)

יישומים אפשריים

  • דגימה קבועה המותקנת בשקופיות
  • הדמיית תאים חיים עם חימום אובייקטיבי
  • מעקב אחר חלקיקים בודדים
  • סה"כ פלואורסצנטי השתקפות פנימית (TIRF)
  • הדמיה יחס-מטרי (עירור כפול / פליטה יחידה או עירור יחיד פליטה כפולה)
  • תאים חיים בתרבית
  • פלואורסצנטי רחב-שדה - פלואורופורים רבים אפשריים באמצעות מונוכרומטור
  • ערימות Z וסדרות זמן

מיקום המצלמה: CRF212

פרטי מיקרוסקופ 

  • Zeiss AxioObserver הפוך מיקרוסקופ פלואורסצנטי
  • Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 מצלמה מונוכרום sCMOS (100fps ברזולוציה מלאה 2048x2048)
  • מנורת פלואורסצנט מתכת הלידית ומנורת העברת הלוגן
  • מטרות שמן 10x, 20x, 63xDIC ו 100x נפט
  • ניגודיות שלב ליעדים פי 10 ו -20
  • ערכות מסנן הקרינה כוללות: DAPI, FITC, Rhodamine / TRITC / Cy3, Texas Red ו- Cy5
  • DIC זמין עם מטרות 63x
  • דוד אובייקטיבי (מטרת מים פי 63) o חתיכת אף ממונעת לערימת Z
  • במה XY ממונעת לרכישת תמונות מרובה עמדות (הדמיית זמן לשגות קבוע או תא)
  • תוכנת רכישת תמונות SlideBook6

יישומים אפשריים 

  • דגימה קבועה המותקנת בשקופיות
  • תאים חיים בצלחת / חימום עם תנור אובייקטיבי
  • DIC (לא קונפוקלי) עם מטרות 63x, מוזג עם פלואורסצנטי או לבד
  • ערימות Z, מונטאז 'והדמיית סדרות זמן

ממוקם ב- CRF224 & CRF226

תוכנה

  • דימות נפח מדעי של Huygens Deconvolution (1)
  • שקופיות (1)
  • חוקר סטריאו (1)
  • נוירולוצידה (1)
  • LASX (לייקה confocal) (1)
  • IQTL (ניתוח סורק טייפון) (1)
  • זן (2)  
  • LSM510 (2)
  • תוכנת הדמיה ספקטרלית של ניואנס (2)

אפשרויות ניתוח

  • לוקליזציה משותפת
  • דקונבולוציה
  • ערבוב ספקטרלי
  • ניתוח עוצמה
  • ניתוח מורפולוגי
  • עיבוד 3D
  • ספירת עצמים
  • מעקב אחר חלקיקים
  • הכנה לפרסום

ממוקם ב- CRF214

טייפון FLA 7000 הוא סורק לייזר מהיר ורב-תכליתי ליישומי הדמיה ביו-מולקולריים כולל:

  • מדידות רגישות וכמותיות של תוויות רדיואיזוטופיות
  • כתמים מערביים כימיים פלואורסצנטיים
  • פלואורסצנטי יחיד (עירור גלוי)
  • תיעוד כתמים קולורימטריים (למשל ג'לים כחולים וקומאסיים מוכתמים בכסף)

ממוקם ב- CRF214

Li-Cor Odessey Fc הוא סורק אינפרא אדום כמעט (680nm ו- 740nm) ליישומי הדמיה ביו-מולקולריים כולל:

  • מדידות רגישות וכמותיות של כתמים מערביים כימילומנצנטיים
  • תיעוד כתמים קולורימטריים (למשל ג'לים כחולים וקומאסיים מוכתמים בכסף)

שירותי מיקרוסקופ כוללים

  • ייעוץ מומחה בנושא תכנון ניסויים והכנת דגימות
  • הכשרת משתמשים
  • מפעיל סייע בהדמיה וברכישת נתונים ראשוניים לבקשות למענקים
  • בית פתוח שנתי להודיע ​​למשתמשים על עדכונים על מכשור, טכנולוגיות ויישומים חדשים
  • קורס מיקרוסקופ לסטודנטים לתארים מתקדמים וחברים באופטיקה ותפקודי מכשירים
  • סדנאות שנתיות המעניקות למשתמשים חדשים הכשרה מעשית בהכנת הדגימות

רכישת מנוחה של FasLGFP_20201113_165
מיקרוסקופ פלואורסצנטי של השתקפות פנימית מוחלטת (TIRF) של ביטוי פעילות FasL-GFP הבסיסי בתאי RBL

שירותי מיקרוסקופיה ושיעורים

Zeiss AxioObserver - Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS מונוכרום מצלמה: 7 דולר לשעה

Yokogawa Spinning Disk: $30/hour

Leica TCS-SP8/FLIM: 50 $ לשעה

Zeiss LSM800: 45 $ לשעה

Olympus IX71 מעקב חלקיקים בודדים/מיקרוסקופ יחס-מטרי (Rm. 218): $25 לשעה

מיקרוסקופ Olympus IX83 TIRF/dSTORM (226 רומי): $30 לשעה

Asylum Research AFM MFP3D BIO (Rm.219): $30 לשעה

אימון כל המכשירים, הדמיה עם הדרכה למפעיל וניתוח: $125 לשעה

  • Confocal (4 שעות)
  • שדה רחב מתקדם (2-3 שעות)
  • מיקרוסקופ כוח אטומי (4-8 שעות)
  • שדה רחב בסיסי (0.5-1 שעה)
  • הדמיה עם הכשרת מפעילים וניתוח (תלוי בפרויקט)

Off-line Workstation, unassisted: $5/hour

מימון מתקנים

אוניברסיטת ניו מקסיקו ומרכז סרטן פלואורסצנטי מיקרוסקופיה משותפת מכירה במימון הבא לרכישת מכשירים או תמיכה במתקנים מאז פתיחתה בשנת 1999.

מימון שוטף

NCI 2P30 CA118100 (PI Willman, C.) "מענק תמיכה במרכז הסרטן של UNM" 9/25 / 05-8 / 31/20

NIGMS 5P50 GM085273 (PI Wilson, BS) "מרכז למידול מרחבי-זמניים של רשתות איתות תאים (STMC)" 08/01 / 08-07 / 31/19

STMC P50GM085273: תמיכה במימון לייקה TCS-SP8 ואולימפוס iX71

מימון מכשור בעבר

NCRR 1 S10 RR14668 (PI Wandinger-Ness, A.) "מיקרוסקופ קונפוקלי של Zeiss LSM510 למחקר מדעי הבריאות" 04/01 / 00-03 / 31/01

NSF MCB9982161 (PI Wandinger-Ness, A.) "תפקוד חלבון Rab7 ואביזר באנדוציטוזיס מאוחר" (רכישת מצלמה דיגיטלית של Hamamatsu להדמיית תאים חיים) 04/01 / 00-03 / 31/06

NCRR S10 RR016918 (PI Wandinger-Ness, A.) "Zeiss Axiovert 200 for Live Cell Imaging Project" 08/01 / 02-04 / 01/04

NCRR S10 RR19287 (PI Wandinger-Ness, A.) "גלאי META ו -405 ננומטר לייזר" 04/01 / 04-03 / 31/05

NCRR 1S10RR025540 (PI Wandinger-Ness, A., co-I Lee, R.) "מיקרוסקופ סטריאולוגיה קונפוקלית לליבת מיקרוסקופ הקרינה של UNM" ARRA 05/01 / 09-03 / 31/10

NSF DGE-0549500 (PI Osinski, M. co-I, Oliver Co-PI) "ננוטכנולוגיה לביולוגיה של תאים ומדעי המוח" (רכישת אביזרים לאולימפוס IX71) 6/15 / 06-5 / 31/11

קרן משפחת מתיוס (PI Lee, R.) "מערכת הדמיה ספקטרלית של ניואנסים, Cri" 01/01 / 09-12 / 31 / -09

NIDDK 3R301 DK050141 (PI Wandinger-Ness, A.) "מנגנונים פתולוגיים של מחלות כליה פוליציסטיות" רכישת Zeiss Axio Observer עבור 510 META) תוסף מינהלי ARRA 09/30 / 09-09 / 29/11

NCRR P20 RR11830 (PI Oliver, J., co-PI Eaton, P.) "שיפור המחקר הרב תחומי בניו מקסיקו" 9 - 30

NCI R24 CA88339 (PI Sklar, L.) "משאב משותף לחקר סרטן UNM" 07/01 / 00-06 / 30/05

NCI P20 CA88807 (PI Willman, C.) "מענק תכנון מרכז הסרטן של אוניברסיטת ניו מקסיקו" 07/01 / 00-06 / 30/05

מימון פנים-ימי 1999 - הווה: 437,266 דולר

המרכז למדעי הבריאות באוניברסיטת ניו מקסיקו

המרכז לסרטן באוניברסיטת ניו מקסיקו

בית הספר לרפואה באוניברסיטת ניו מקסיקו המחלקה לפתולוגיה